凝膠色譜柱(Gel filtration chromatography)是一種基于分子尺寸差異的層析技術。它利用多孔的凝膠填充柱,將樣品按照其大小分離出來。 凝膠是由交聯的聚合物鏈構成的網絡結構,在固定相中起到分離作用。當樣品通過凝膠色譜柱時,大分子無法進入凝膠的孔隙中,只能沿著凝膠表面流動,最終被快速洗脫;而小分子可以進入孔隙中,因此需要更長時間才能從柱中洗脫。
凝膠色譜柱可以分離不同大小的生物大分子,如蛋白質、核酸和多糖等。在實驗室中,它通常用于純化蛋白質混合物,去除雜質或分離不同的構象或配體狀態。
凝膠色譜柱選擇的關鍵是確定所需的分離程度和樣品吸附量。選擇較小孔徑的凝膠可以提高分辨率,但也可能增加樣品吸附量,并導致失去生物活性。另一方面,較大孔徑的凝膠可以處理較大的樣品負載,但分離效果可能較差。
凝膠色譜柱有許多變種和改進,例如逆向凝膠色譜柱和超高效凝膠色譜柱。逆向凝膠色譜柱是一種分離小分子的方法,與傳統的凝膠色譜柱相比,可以提高樣品吸附量和分辨率。超高效凝膠色譜柱在樣品分離方面具有更強的分辨率和靈敏度,可以分離非常相似的多肽和蛋白質分子。
通過上面的內容不難發現凝膠色譜柱是分離生物大分子的重要工具,在生物化學和分子生物學研究中廣泛應用。
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