中壓層析(MPLC)是一種介于常規層析和高效液相色譜(HPLC)之間的分離技術。相對于常規層析,MPLC有更高的分離效率和純度,但比HPLC更簡單易用,并且可以應用于較大量的樣品。
中壓層析柱是中壓層析技術中的核心設備。它與常規的層析柱相似,但可以承受較高的壓力,通常為1-10 bar。中壓層析柱的質量和設計對于分離效率很重要。它需要具有良好的化學穩定性、低死區容積、均勻的顆粒分布和尺寸,以及適當的柱長度和直徑,以滿足特定的分離需求。
中壓層析柱可以用于分離各種不同類型的化合物,包括有機分子、多肽、蛋白質、核酸和其他生物大分子。其優點包括分離效率高、選擇性好、操作簡單、建設成本低廉等特點。同時,中壓層析柱還可以應用于大量生產中的制備和純化工藝,以及生物醫學和制藥領域的研究和開發。
應用領域:
1. 生物制藥學
中壓層析柱被廣泛應用于生物制藥學中的分離和純化過程中,例如分離和純化重組蛋白質、抗體、基因表達產物等。它可以實現高純度的生物制品,且不會對生物分子的結構和活性產生影響。
2. 食品和飲料科學
產品可以用于食品和飲料科學領域中的分離和檢測,例如提取和分離天然色素、香料、抗氧化劑等。它可以更準確地確定和量化食品和飲料中的化學成分,以及在食品和飲料的質量控制和研發中使用。
3. 醫藥化學和天然藥物學
產品可以用于醫藥化學和天然藥物學的分離和純化,例如提取和分離活性成分、化合物和天然藥物的生物堿、皂苷等。它也可以用于研究植物藥物和傳統草藥的成分和組成,以及新藥物的研發。
中壓層析柱適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進入血液制品生產,利用層析法,可純化血漿中多種蛋白,例如白蛋白等等。越來越多生產單位相繼使用,效果好,甚為滿意。
配套的層析柱轉換接頭,結構合理,使用方便,能保護凝膠面不受液流的破壞,層析流動分布均勻和分辨率高等優點。轉換接頭根據實驗需要,可調節長短150mm左右,特殊長短可另行定制。
層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。
此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關,但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。
分族分離時用短柱,一般凝膠柱長20-30厘米,柱高與直徑的比較5:1─10:1,凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。
分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1,常用凝膠柱有50×25厘米,10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應盡可能的小,如果支掌濾板下的死體積大,被分離組分之間重新混合的可能性就大,其結果是影響洗脫峰形,出現拖尾出象,降低分辯力。在分離時,死體積不能超過總床體積的1/1000。
中壓層析柱是一種重要的分離和純化工具,廣泛應用于生物醫學、制藥、食品和飲料、醫藥化學和天然藥物學等眾多領域中。隨著分析技術的不斷發展,中壓層析柱也將繼續發展和應用于更廣泛的領域。
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